Jurnal Internasional EPHB2 mengatur aktivasi trombosit | Jurnal Darah

Download Jurnal Disini

Secara historis, penelitian rinci dari cacat trombosit bawaan yang jarang terjadi telah memberikan wawasan unik tentang protein kunci yang terlibat dalam fungsi platelet manusia. Dalam masalah ini Darah Berrou et al menggunakan analisis genomic sequencing / fungsional lanjutan untuk mengidentifikasi peran baru untuk reseptor ephrin transmembran subkelas B2 (EPHB2) dalam mengatur aktivasi trombosit. 1

(A) Pada batas sel-sel, reseptor efrin / ligan ephrin kompleks mengatur adhesi seluler dan signaling, termasuk ligan -induced sinyal luar-dari αIIbβ3. (B) Dibandingkan dengan tipe liar, mutasi Arg745Cys (R745C) yang baru diidentifikasi dalam domain tirosin kinase EPHB2 dikaitkan dengan gangguan aktivasi platelet sebagai respons terhadap agonis yang bekerja pada reseptor G protein-coupled (GPCRs) atau glikoprotein VI (GPVI). dan fosforilasi yang dilemahkan dari Lyn, Syk, dan FcRγ dan aktivasi αIIbβ3 ke luar. Lihat teks untuk perincian dan referensi.

Keluarga reseptor kinase tirosin kinase ephrin (subclass A dan B) dan ligan ephrin terkait membran mereka sangat dilestarikan di seluruh organisme multisel, dari invertebrata primitif hingga mamalia, konsisten dengan peran penting mereka dalam mengatur interaksi sel-sel. 2 Ligan ephrin yang banyak phosphatidylinositol (subclass A) atau transmembran (B) membentuk kompleks transelular dengan reseptor efrin spesifik. Reseptor-reseptor Ephrin terdiri dari suatu domain ligand ligand ekstraselular yang dilestarikan, domain-domain yang mirip sistein-kaya-fibronektin, suatu domain transmembran, dan suatu domain tirosin kinase intraseluler. Kompleks ephrin / reseptor ini dinyatakan dalam batas-batas sel-sel dan mengatur jalur sinyal sel, penataan ulang sitoskeleton yang mengandung aktin, regulasi redoks melalui aktivasi nikotinamida adenin dinukleotida fosfat oksidase (Nox), dan aktivasi protease, termasuk disintegrin dan metalloproteinase-10 (ADAM10) terlibat dalam downregulating ekspresi reseptor EPH. 3 Trombosit mengekspresikan Eph kinase, EphA4 dan EphB1, dan ligan mereka, ephrinB1, dan berkontribusi terhadap stabilitas trombus. 4 Lebih Baru-baru ini, platelet juga telah ditemukan untuk mengekspresikan EPHB2 5 Trombosit dari tikus yang dimodifikasi secara genetik di mana seluruh ekor sitoplasma EPHB2 digantikan oleh β-galactosidase yang menunjukkan tidak hanya peran untuk kompleks efra / reseptor dalam kesenjangan antara platelet adhesif, terutama yang mengatur integrin platinum αIIbβ3 di luar-sinyal dalam pembentukan trombus dan retraksi bekuan, tetapi juga kontak-indep peran akhir untuk EPHB2 dalam mengatur jalur sinyal trombin dan kolagen dan pensinyalan αIIbβ3 in-out. 5 Dalam edisi ini, Berrou et al telah mengkonfirmasi peran untuk EPHB2 dalam mengatur jalur aktivasi trombosit ini secara independen dari ligasi reseptor (lihat gambar).

Dua pasien, saudara laki-laki dan saudara perempuan dari orang tua kerabat, pada awalnya diteliti pada remaja awal mereka. Mereka menunjukkan perdarahan subkutan spontan dan perdarahan hebat setelah luka ringan. 1 Pada saudara laki-laki, ada juga anemia anak-anak karena perdarahan gastrointestinal yang berlebihan. Tidak ada orang tua yang menunjukkan kecenderungan pendarahan. Jumlah trombosit untuk semua anggota keluarga berada dalam kisaran normal atau cukup berkurang. Agregasi platelet pasien dikompromikan sebagai respons terhadap adenosine 5′-difosfat (ADP), asam arakidonat, dan kolagen, tetapi tidak untuk ristocetin, sementara jumlah granula padat dan sekresi tampak normal. 1 Sedangkan pada dekade-dekade sebelumnya mengidentifikasi spesifik faktor penyebab atau mutasi yang terkait dengan pendarahan yang tidak dapat dijelaskan adalah upaya yang sulit, 6 fitur kunci dari penelitian ini adalah penerapan sekuensing eksome lengkap untuk mengidentifikasi 6 varian langka homozigot nonsynonymous bersama oleh 2 pasien, yang bersama-sama dengan lainnya. bukti yang dijelaskan secara rinci dalam publikasi memungkinkan mutasi missale homozigot 2233C> T (Arg745Cys) pada gen untuk reseptor EPHB2 tirosin kinase untuk diidentifikasi sebagai penyebab utama yang paling mungkin dari defek. 1 Kedua orang tua heterozigot. untuk mutasi ini, yang terletak di dalam motif tirosin kinase intraseluler yang sangat dilestarikan segera sebelum Asp746, akseptor proton yang diduga penting untuk adenosine triphosphate-dependent kinase active site dari EPHB2. Gangguan aktivitas tirosin kinase oleh mutasi Arg745Cys dikonfirmasi oleh menurunnya fosforilasi tirosin konvulsi di Tyr594 / Tyr604 meskipun tingkat ekspresi EPHB2 serupa pada pasien dan trombosit kontrol.

Sedangkan penelitian sebelumnya yang melibatkan kompleks EPHB1 / B2 menunjukkan signifikan peran dalam mengatur integrin αIIbβ3 di luar-dalam sinyal dan fungsi, 45 αIIbβ3 pensinyalan luar-dalam (retraksi bekuan, adhesi platelet, dan penyebaran pada fibrinogen) hanya sedikit terpengaruh dalam trombosit pasien. Sebaliknya trombosit pasien menunjukkan aktivasi yang rusak dari αIIbβ3 (sinyal keluar-dalam) sebagai respons terhadap aktivasi oleh agonis yang bekerja di GPCR (ADP, ligan reseptor thrombin) atau agonis yang bekerja di GPVI (kolagen, racun ular convulxin) dan gangguan pembentukan thrombus pada permukaan berlapis kolagen di bawah aliran ex vivo pada laju geser setara arteri 1500 / s. Fosforilasi tirosin dari molekul sinyal, Lyn kinase, limpa tirosin kinase (Syk), dan Fc receptor γ-chain (FcRγ), semua yang sebelumnya terlibat dalam pensinyalan kompleks GPVI / FcRγ, sangat berkurang tanpa adanya trombosit-trombosit yang menunjukkan peran langsung atau tidak langsung untuk EPHB2 dalam mengatur aktivasi platelet GPVI-dependent (lihat gambar panel B). Convulxin yang bekerja di GPVI menginduksi fosforilasi Tyr594 / Tyr604 dari tipe liar tetapi bukan mutan EPHB2. Penemuan ini dikonfirmasi dalam penelitian overekspresi EPHB2 tipe liar atau mutan pada sel basophilic leukemia (RBL-2H3) tikus (yang mengekspresikan kompleks GPVI / FcRγ), di mana mutasi Arg745Cys menghambat fosforilasi EPHB2 yang bergantung pada konvulsi, tetapi tidak ephrin yang diinduksi ligan. Pengelompokan EPHB2, yang sebelumnya mendukung relevansi Arg745 / Asp746 dalam mengganggu fosforilasi tirosin EPHB2

Temuan ini menimbulkan pertanyaan menarik mengenai mekanisme potensial untuk bagaimana EPHB2 mutan bertindak untuk menghambat jalur pemberian sinyal bergantung GPVI / FcRγ- dan / atau GPCR trombosit, tampaknya tanpa persyaratan untuk kontak platelet-platelet / ligan ephrin, dan meskipun tidak ada perbedaan yang dibuktikan dalam tingkat ekspresi reseptor-reseptor lainnya. Hal ini kemungkinan besar merupakan kombinasi dari faktor yang berkontribusi terhadap defek trombosit. Khususnya, mikroskop elektron mengungkapkan perbedaan yang signifikan dalam bentuk dan kecenderungan fragmentasi dalam trombosit Arg745Cys EPHB2, konsisten dengan peran EPHB2 di megakaryocytes / trombosit yang beredar dalam produksi trombosit dan pemeliharaan sitoskeletal. Kurangnya fosforilasi EPHB2 yang bermutasi juga dapat berdampak pada lokalisasi atau aktivitas rekombinan sinyal-jalur kinase dan / atau fosfatase, yang mempengaruhi sinyal oleh GPVI. Menariknya, seperti kompleks reseptor ephrin / ephrin, 34 keterlibatan GPVI mengarah ke aktivasi dari kedua Nox1 / 2 dan ADAM10, 79 terlibat masing-masing dalam generasi spesies oksigen reaktif intraseluler melalui jalur Syk-dependent dan Syk-independen, dan dalam shedding metalodroteinase-dimediasi ektodomain. Dalam hal ini, domain sitoplasma dari platelet manusia GPVI juga mengandung tiol yang tidak berpasangan, yang menyebabkan dimerisasi tergantung-cepat GPVI disulfida setelah stimulasi agonis, 10 dan meskipun belum ada bukti, sangat menarik untuk berspekulasi. pada interaksi menyimpang yang melibatkan Cys745 di EPHB2 mutan, terutama jika EPHB2 biasanya terkait dengan kompleks GPVI / FcRγ.

Singkatnya, identifikasi mutasi spesifik dalam EPHB2 pada 2 anggota keluarga dengan defek perdarahan berat dan cacat GPVI / GPCR- jalur persinyalan yang bergantung memberi pemahaman baru tentang produksi dan fungsi platelet manusia. Ini akan menarik di masa depan untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi ini dan mutasi lain dalam populasi yang membantu menentukan mekanisme yang tepat yang mengatur reaktivitas platelet.

Download Jurnal Disini

Tags: